全自動梯度PCR儀可以自動完成PCR反應(yīng)的各個步驟，包括樣品加載、溫度控制、擴(kuò)增循環(huán)等，大大簡化了PCR實(shí)驗(yàn)操作的復(fù)雜度和時(shí)間，通過精確控制溫度，使引物與模板結(jié)合、變性、退火和擴(kuò)增等PCR反應(yīng)的各個步驟得以高效進(jìn)行。溫度梯度功能允許在不同溫度下進(jìn)行多個PCR反應(yīng)，以尋找擴(kuò)增條件。
 

　　全自動梯度PCR儀的工作原理如下：
 

　　1.將待測樣本加入PCR反應(yīng)管(通常是一個細(xì)小的玻璃管)，然后將其放置在設(shè)備的樣品盒中。
 

　　2.在整個實(shí)驗(yàn)開始之前，根據(jù)所需放大的目標(biāo)DNA片段的序列信息，需要選擇合適的引物。在引物與模板DNA的結(jié)合過程中，溫度被加熱至引物與模板結(jié)合的溫度。
 

　　3.在PCR擴(kuò)增過程中，溫度是一個關(guān)鍵因素。梯度PCR儀有能力在不同的溫度區(qū)間中進(jìn)行多個PCR反應(yīng)，以幫助確定溫度范圍。因此，在實(shí)驗(yàn)開始之前，用戶可以設(shè)置反應(yīng)的溫度梯度，以使每個PCR反應(yīng)管在反應(yīng)過程中經(jīng)歷不同的溫度。這有助于確定適合目標(biāo)DNA片段擴(kuò)增的最佳溫度。
 

　　4.在PCR反應(yīng)的初始階段，反應(yīng)溫度被提高至變性溫度，通常為94-98°C。在此溫度下，DNA模板的雙鏈被解開，形成兩條單鏈DNA。
 

　　5.在第二階段，溫度被降低至引物與模板結(jié)合的溫度。在此溫度下，引物會與目標(biāo)DNA片段的模板互補(bǔ)配對。
 

　　6.在第三階段，溫度被升高至延伸溫度，通常為72°C。在此溫度下，DNA聚合酶與引物中的基因組進(jìn)行互補(bǔ)，并合成新的DNA鏈。
 

　　7.實(shí)時(shí)監(jiān)測：還配備了光學(xué)傳感器，可以實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR反應(yīng)過程中DNA擴(kuò)增的程度。通過監(jiān)測PCR反應(yīng)瓶中的熒光信號強(qiáng)度的變化，可以定量地評估DNA擴(kuò)增的效果。
 

　　全自動梯度PCR儀的使用方法：
 

　　1.準(zhǔn)備PCR反應(yīng)液：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，按照適當(dāng)?shù)谋壤龑⒛０錎NA、引物、dNTPs和聚合酶等反應(yīng)物混合在一起。
 

　　2.將反應(yīng)液分裝至PCR管或片上PCR孔中。
 

　　3.將PCR管或PCR片放置在樣品位中。
 

　　4.設(shè)置PCR反應(yīng)參數(shù)：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，設(shè)定PCR儀的溫度程序、擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)等參數(shù)。
 

　　5.點(diǎn)擊啟動按鈕，開始PCR反應(yīng)。
 

　　6.根據(jù)需要，可以監(jiān)測PCR反應(yīng)的進(jìn)度和結(jié)果。